打鱼注册送分30元_打鱼送38元彩金

当前位置 首页 > 高原之火海棠

高原之火海棠

取5μL在12%非变性聚丙烯胺凝胶中恒压电泳分离

时间:2019-08-21 03:49来源:未知 作者:admin 点击:
:秋海棠(Begoniagrandis)为秋海棠科秋海棠属的观赏植物,可观叶、观花,在我国已有多年盆花栽培史。近年来,随着秋海棠的需求量日益增加,种植面积逐年扩大。但是由于秋海棠品种众多和区域间引种利用,地方品种遗传相似性高,传统的形态学和细胞学的鉴定结

  :秋海棠(Begoniagrandis)为秋海棠科秋海棠属的观赏植物,可观叶、观花,在我国已有多年盆花栽培史。近年来,随着秋海棠的需求量日益增加,种植面积逐年扩大。但是由于秋海棠品种众多和区域间引种利用,地方品种遗传相似性高,传统的形态学和细胞学的鉴定结果易受环境因素的影响,导致判定结果不一致的问题,同时田间测定周期长,不能及时、快捷地为新品种侵权、盗窃等案件提供鉴定依据。DNA指纹图谱能够从DNA水平上鉴定品种间的差异或遗传相似性。而微卫星(又称简单重复序列,SSR)是由1-6个核苷酸组成的短序列串联重复多次而组成的一段DNA。由于微卫星中重复单元的重复次数不同,因而扩增出的微卫星序列的长度呈现多态性。微卫星序列具有多态性较高,重复性和稳定性好等特点,是十分有效的分子标记,被广泛应用于品种鉴定、指纹图谱构建等领域。随着国际上对植物新品种保护制度不断的完善,越来越多的育种者对新品种权保护的意识增强,积极申请新品种保护。为了有效地保护我国秋海棠的品种知识产权和育种者的权利,急需开发有效的技术措施对秋海棠品种进行精确鉴定,从DNA水平上给予秋海棠品种独特的指纹身份。技术实现要素:本发明的目的在于提供一种新的高效、准确、低成本的利用SSR指纹图谱鉴别秋海棠品种的方法,并提供该方法的应用。本发明利用SSR指纹图谱技术对秋海棠品种进行鉴定,从而达到保护秋海棠品种的目的。为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:一种SSR指纹图谱鉴别秋海棠品种的方法,首先抽提秋海棠品种的DNA,PCR扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测初步筛选SSR标记,然后使用6对核心序列SSR荧光标记引物进行PCR扩增,产物经荧光毛细管电泳检测构建秋海棠品种的SSR指纹通图谱。根据所述的一种SSR指纹图谱鉴别秋海棠品种的方法,该方法包括下述步骤:(1)提取待鉴别样品的DNA:采用天根试剂盒从秋海棠叶片中提取待鉴定样品秋海棠基因组DNA,从0.1g秋海棠幼嫩叶片中提取基因组DNA,最后将DNA稀释至50ng/ul,置于-20度冰箱中保存备用;(2)SSR标记的初步筛选:选取50个秋海棠SSR标记引物序列,利用待鉴定秋海棠品种对这些引物进行筛选,PCR反应总体积12.5ul,包括6.75ul的2xEasyTaqPAGEBuffer、4.75μLddH2O、10pmol正向和反向引物各0.5μL,0.5μl的DNA;PCR反应程序使用touchdown程序,退火温度在60-55度,每个循环退火温度下降0.5度,95度预变性5min;94度变性30s,60度退火30s,72度延伸30s,每个循环退火温度降0.5度,共10个循环;94度变性30s,55度退火30s,72度延伸30s,共30个循环;最后72度延伸5min,PCR扩增反应结束后,在扩增产物中加入3μL的上样缓冲液,取5μL在12%非变性聚丙烯胺凝胶中恒压电泳分离,硝酸银染色显影检测,扩增频率高、条带单一的SSR位点为筛选位点,获得了6个标记,这6个标记为BI7165、BI4804、BI3301、BI4279、BI2961和BC332;(3)全自动毛细管电泳系统复筛,根据电泳结果筛选出核心引物:利用荧光标记的核心SSR引物进行PCR扩增,20μL的PCR体系包括1μL的浓度约50ng/μL的DNA模板、2μL的10xBuffer、10pmol的正向、反向引物各0.4μL、1.6μL的25mMMgCl2、1.6μL的2.5mMdNTP、0.15μL的5unit/μLTaqDNA聚合酶和12.85μL的ddH2O,正向引物为FAM、HEX或TAMRA荧光标记的引物;PCR扩增片段在ABI3730XL仪器上进行分析,采用500LIZ分子量内标检测片段大小。将1ulPCR产物加入到DNA分析仪专用深孔板空中,板中各孔分别加入0.1uL的500LIZ分子量内标和9.9uL去

------分隔线----------------------------

主页 | 高原之火海棠 | 海岛藤属 | 红小麻属 | 华箬竹属 | 嘉榄属 | 锦葵科

联系电话:邮箱:

Copyright © 2002-2017 DEDECMS. 织梦科技 版权所有

打鱼注册送分30元_打鱼送38元彩金-二维码